Leucocyte Platelet Rich Fibrin with Autologous Gingival Fibroblasts in the Treatment of Adjacent Recession Defects / Fibrina Rica en Plaquetas Leucocitarias con Fibroblastos Gingivales Autólogos en el Tratamiento de Defectos de Recesión Adyacentes

ABSTRACT: Periodontium can submit changes that lead to loss of integrity, such as periodontal disease, immune disorders or traumatic brushing. One of the most common consequences resulting from these events is the apical migration of gingival marginal tissue. Among biomaterials used for periodontal tissue regeneration, fibrin matrices have received significant attention to correct gingival recessions. Five oral mucosa biopsies were extracted, fibroblasts were in vitro cultured and frozen in liquid nitrogen. Three 10 mL glass sterile tubes were filled with patient blood and centrifuged immediately; clots were extracted and compressed to obtain L-PRF membranes. Autologous oral mucosa fibroblasts were added to the membranes and surgical procedures were performed in five patients. L-PRF fibrin network pore size was too small to allow human fibroblasts penetration but they were firmly attached to membrane surface. Gingival fibroblasts from fresh cell culture and recently thawed were used to attach on the L-PRF membranes. It was possible to establish a protocol for blood collection, centrifugation, fibrin clot compression, fibroblast adhesion to the membrane surface and patient application in a relatively short time (1 hour-1 hour and 30 minutes). Two patients expressed pain symptoms and the other ones presented light swelling without pain. In the first week, adjacent tissue showed few inflammation signs. Research efforts are being conducted to develop more conservative surgical techniques and new biomaterials that can promote cellular proliferation. Because of its properties, L-PRF membranes represent a tempting alternative. A combined technique to treat adjacent recession defects with L-PRF membranes and autologous oral mucosa fibroblasts in a coronal displaced flap did not show initial advantage compared with a gold standard surgery that includes an autologous soft tissue graft. Nevertheless, it could be an alternative for clinical application as a new functional cell biomaterial. More clinical evidence is needed.

RESUMEN: El periodonto puede presentar cambios que conducen a la pérdida de integridad, como la enfermedad periodontal, los trastornos inmunes o el cepillado traumático. Una de las consecuencias más comunes que resultan de estos eventos es la migración apical del tejido marginal gingival. Entre los biomateriales utilizados para la regeneración del tejido periodontal, las matrices de fibrina han recibido una atención significativa para corregir las recesiones gingivales. Se extrajeron cinco biopsias de mucosa oral, los fibroblastos se cultivaron in vitro y se congelaron en nitrógeno líquido. Tres tubos de vidrio estériles de 10 ml se llenaron con sangre del paciente y se centrifugaron inmediatamente. Los coágulos fueron extraídos y comprimidos para obtener membranas de L-PRF. Se agregaron fibroblastos autólogos de mucosa oral a las membranas y se realizaron procedimientos quirúrgicos en cinco pacientes. El tamaño de poro de la red de fibrina L-PRF era demasiado pequeño para permitir la penetración de los fibroblastos humanos, pero estaban firmemente unidos a la superficie de la membrana. Se usaron fibroblastos gingivales de cultivos de células frescas y recientemente descongelados para unirlos a las membranas L-PRF. Fue posible establecer un protocolo para la extracción de sangre, centrifugación, compresión de coágulos de fibrina, adhesión de fibroblastos a la superficie de la membrana y aplicación al paciente en un tiempo relativamente corto (1 hora, 1 hora y 30 minutos). Dos pacientes expresaron síntomas de dolor y los otros presentaron hinchazón leve sin dolor. En la primera semana, el tejido adyacente mostró pocos signos de inflamación. Se están realizando esfuerzos de investigación para desarrollar técnicas quirúrgicas más conservadoras y nuevos biomateriales que puedan promover la proliferación celular. Debido a sus propiedades, las membranas L-PRF representan una alternativa tentadora. Una técnica combinada para tratar los defectos de recesión adyacentes con membranas de L-PRF y fibroblastos de mucosa oral autóloga en un colgajo coronal desplazado no mostró una ventaja inicial en comparación con una cirugía estándar que incluye un injerto de tejido blando autólogo. Sin embargo, podría ser una alternativa para la aplicación clínica como un nuevo biomaterial de células funcionales. Se necesita más evidencia clínica.

Queratinocitos modificados geneticamente por vectores retrovirales / Genetic modifying Keratinocytes for retroviral vectors

Objetivo: revisar la literatura relacionada con la utilización de queratinocitos como células blanco de transferencia de genes en general y utilizando vectores retrovirales como vehículo de transferencia en particular. Fuente de los datos: se describen resultados obtenidos acerca del tema mencionado, publicados en las principales revistas de investigación en dermatología y terapia génica; además información obtenida de revisiones recientes publicadas por expertos en el área y algunas páginas web. Selección de los datos: se seleccionaron los datos más relevantes en relación con el tema propuesto, de trabajos publicados en los últimos 10 años, en los cuales se abordara experimentalmente el tema. Extracción de los datos: se incluyeron datos obtenidos de algunas páginas web especializadas en el tema de queratinocitos, transferencia de genes y vectores retrovirales (http://info.med.yale.edu/). (www.interscience.wiley.com). entre otros. Adicionalmente, datos de publicaciones y revisiones que tuvieran relevancia en áreas como: principios generales de transferencia de genes, tipos de vectores más utilizados, aplicaciones más importantes de los queratinocitos, importancia, ventajas y desventajas de estas células como células blanco de transferencia. Las bases de datos utilizadas fueron: Entrez Home.http:// www.ncbi.nim.nih.gov/Entrez/. SRS:http://srs.ebi.ac.uk/, DBGET: www.genome.ad.jp/dbget/ dbget2.html/ Síntesis de los datos: las bases de la terapia génica fueron cimentadas a principios de la década de los 60; este progreso científico continuó en los años ochenta con el desarrollo de las técnicas de clonación de genes, los vectores virales, los cultivos celulares y las técnicas de transfección in vitro. La comprensión de los procesos moleculares y celulares de muchas enfermedades, permitió pensar en la transferencia de genes como una herramienta terapéutica para el tratamiento tanto de enfermedades heredadas como adquiridas. Igualmente la transferencia de genes ha hecho posible introducir y expresar material genético exógeno en las células somáticas de mamíferos, proporcionando una poderosa herramienta para el estudio de la función y la regulación genética. Los queratinocitos han sido utilizados como células blanco para transferencia de genes...